有 关于双缩脲试剂的配制顺序_双缩脲试剂的配制方面的知识,小编在此整里出来,给大家作为参考,下面就详细的介绍一下关于双缩脲试剂的配制顺序_双缩脲试剂的配制的相关内容。
(资料图片仅供参考)
1、先单独加入NaOH溶液是为了营造一个碱性环境,在碱性环境下双缩脲试剂B中的Cu2+与蛋白质肽键络合产生颜色反应。
2、如果先将双缩脲试剂A与双缩脲试剂B混合,即NaOH与CuSO4溶液混在一起,那么就会产生Cu(OH)2沉淀,药剂就会失去作用,看不到效果,也就无法判断是否存在蛋白质。
3、双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
4、先将双缩脲试剂A加入组织样液,摇荡均匀(必须营造碱性环境),再加入双缩脲试剂B,摇荡均匀。
5、如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。
6、具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
7、蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。
8、颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
9、扩展资料:双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。
10、在强碱性溶液中,双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物,称为双缩脲反应。
11、凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。
12、紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
13、干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
14、此法的优点是较快速 ,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少。
15、主要的缺点是灵敏度差,不适合微量蛋白的测定。
16、参考资料来源:百度百科-双缩脲法。
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